banyè

Entwodiksyon teknoloji ekstraksyon asid nikleik

Nasid ukleikintwodiksyon

Asid nikleik divize an asid deoxyribonukleik (DNA) ak asid ribonukleik (RNA), pami ki RNA divize an RNA ribozomal (rRNA), mesaje RNA (mRNA) ak transfere RNA (tRNA) selon diferan fonksyon li yo.ADN se sitou konsantre nan nwayo a, mitokondri ak klowofòm, pandan y ap RNA sitou distribiye nan sitoplasm la.Kòm baz materyèl ekspresyon jèn, ekstraksyon asid nikleyik jwe yon wòl trè enpòtan nan rechèch byoloji molekilè ak dyagnostik molekilè klinik.Konsantrasyon an ak pite nan ekstraksyon asid nikleyik pral dirèkteman afekte PCR ki vin apre a, sekans, konstriksyon vektè, dijesyon anzim ak lòt eksperyans.

 Ekstraksyon asid nikleik ak metòd pou pirifye 

① Metòd ekstraksyon fenol / kloroform

Ekstraksyon fenol / klowofòm se yon metòd klasik pou fè ekstraksyon ADN, ki sitou itilize de diferan solvang òganik pou trete echantiyon yo, fonn ADN ki baze sou asid nikleyik nan faz dlo a, lipid nan faz òganik la, ak pwoteyin ant de faz yo.Metòd sa a gen avantaj ki genyen nan pri ki ba, pite segondè ak bon efè.Dezavantaj yo se operasyon konplike ak tan long.

② Trizol metòd

Metòd Trizol se yon metòd klasik pou fè ekstraksyon RNA.Metòd Trizol la divize an faz akeuz ak faz òganik apre santrifijasyon ak klowofòm, nan ki RNA a fonn nan faz akeuz la, faz akeuz la transfere nan yon nouvo tib EP, presipitasyon yo jwenn apre ajoute izopropanol, ak Lè sa a, pirifikasyon etanòl.Metòd sa a apwopriye pou fè ekstraksyon RNA nan tisi bèt, selil ak bakteri.

③ Metòd pou pirifye kolòn santrifujeur

Metòd pou pirifye kolòn santrifujeur ka adsorbe ADN espesyalman nan materyèl espesyal adsorption matris Silisyòm, pandan y ap RNA ak pwoteyin ka pase san pwoblèm, ak Lè sa a, sèvi ak gwo sèl ki ba PH konbine asid nikleyik, ki ba sèl segondè valè PH elisyon separe ak pirifye asid nikleyik.Avantaj yo se gwo konsantrasyon pou pirifye, estabilite segondè, pa bezwen sòlvan òganik, ak pri ki ba.Dezavantaj la se ke li bezwen yo dwe santrifuje etap pa etap, plis etap operasyon.

fiytjt (1)

④ Metòd pèl mayetik

Metòd pèl mayetik la se divize echantiyon tisi selil la atravè lysate la, lage asid nikleyik nan echantiyon an, ak Lè sa a, molekil asid nikleyik yo espesyalman adsorbed sou sifas pèl mayetik la, pandan y ap enpurte tankou pwoteyin ak sik yo rete nan. likid la.Atravè etap yo nan divize tisi selilè, mayetik chaplèt obligatwa ak asid nikleyik, lave asid nikleyik, elisyon asid nikleyik, elatriye, asid nikleyik pi finalman jwenn.Avantaj yo se operasyon senp ak itilizasyon kout tan, san yo pa bezwen santrifujasyon etap.Li gen kondisyon teknik ki ba epi li ka reyalize operasyon otomatik ak mas.Konbinezon espesifik pèl mayetik ak asid nikleyik fè asid nikleyik ekstrè ak konsantrasyon segondè ak pite.Dezavantaj la se ke pri sou mache aktyèl la se relativman chè.

fiytjt (2)

⑤ Lòt metòd

Anplis de sa nan kat metòd ki anwo yo, gen bouyi fann, metòd sèl konsantre, metòd detèjan anionik, metòd ultrasons ak metòd anzimatik, elatriye.

 Kalite ekstraksyon asid nikleyik

Foregene gen pi gwo platfòm PCR dirèk nan mond lan, platfòm izolasyon RNA doub kolòn (ADN sèlman + RNA sèlman).Pwodwi prensipal yo gen ladan twous izolasyon ADN / RNA, PCR ak Direct PCR reyaktif seri molekilè reyaktif laboratwa.

① Ekstraksyon RNA total

Echantiyon total ekstraksyon RNA gen ladan san, selil, tisi bèt, plant, viris, elatriye. Segondè pite ak konsantrasyon segondè nan RNA total ka jwenn nan ekstraksyon total RNA, ki ka itilize nan RT-PCR, analiz chip, tradiksyon in vitro, klonaj molekilè, Dot Blot ak lòt eksperyans.

Foregene ki gen rapòTwous Izolasyon RNA

fiytjt (3)

Animal Total RNA izole Twous--Byen vit ak efikasite ekstrè-wo pite ak-wo kalite total RNA soti nan tisi bèt divès kalite.

fiytjt (4)

Twous izolasyon RNA total selilè--RNA total ki trè pirifye ak bon jan kalite ka jwenn nan plizyè selil kiltive nan 11 minit.

fiytjt (5)

Twous Izolasyon RNA Total Plant--Ekstrè RNA total bon jan kalite byen vit nan echantiyon plant ak polisakarid ki ba ak kontni polifenol.

fiytjt (6)

Twous izolasyon RNA viral--Tout vit izole epi pirifye RNA viral nan echantiyon tankou plasma, serom, likid kò san selil ak supernatant kilti selil.

② Ekstraksyon ADN jenomik

Echantiyon ekstraksyon ADN genomik gen ladan tè, poupou, san, selil, tisi bèt, plant, viris, elatriye. Ekstraksyon ADN jenomik ka itilize nan dijesyon anzim, konstriksyon bibliyotèk ADN, PCR, preparasyon antikò, analiz Western blot hybridization, chip jèn, segondè. -sekans debi ak lòt eksperyans.

Foregene ki gen rapòTwous Izolasyon ADN

fiytjt (7)

Twous Izolasyon ADN tisi bèt--Rapid ekstraksyon ak pirifikasyon ADN jenomik soti nan plizyè sous, tankou tisi bèt, selil, elatriye.

fiytjt (8)

Twous Midi ADN san (1-5ml)--Prifye byen vit bon jan kalite ADN jenomik soti nan san antikoagulasyon (1-5ml).

fiytjt (9)

Twous Izolasyon ADN pou Prelèvman Bukal/Kat FTA--Prifye byen vit bon jan kalite ADN jenomik soti nan echantiyon bukal/FTA Kat.

fiytjt (10)

Twous Izolasyon ADN Plant--Prifye byen vit epi jwenn bon jan kalite ADN jenomik nan echantiyon plant (ki gen ladan polisakarid ak echantiyon plant polifenol)

③ Ekstraksyon Plasmid

Plasmid se yon kalite sikilè ti molekil ADN nan selil yo, ki se yon konpayi asirans komen pou rekonbinasyon ADN.Metòd ekstraksyon plasmid la se retire RNA, separe plasmid ak ADN jenomik bakteri, epi retire pwoteyin ak lòt enpurte pou jwenn plasmid relativman pi.

fiytjt (11)

Jeneral Plasmid Mini Twous--Prifye byen vit ADN plasmid kalite siperyè soti nan bakteri transfòme pou eksperyans woutin byoloji molekilè tankou transfòmasyon ak dijesyon anzim.

④ Lòt kalite ekstraksyon, ekstraksyon miRNA, elatriye.

fiytjt (12)

Twous izolasyon miRNA bèt--Vit epi efikasman ekstrè ti fragman RNA nan 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA soti nan divès tisi bèt ak selil

 Kondisyon pou fè ekstraksyon asid nikleyik ak rezilta pirifikasyons

① Pou asire entegrite estrikti prensipal la nan asid nikleyik.

② Diminye entèferans pwoteyin, sik, lipid ak lòt makromolekil

③ Pa ta dwe gen okenn sòlvan òganik oswa gwo konsantrasyon nan iyon metal ki ka anpeche anzim nan echantiyon asid nikleyik.

④ RNA ak lòt kontaminasyon asid nikleyik yo ta dwe elimine lè ekstrè ADN, ak vis vèrsa.

 


Tan pòs: 24-Nov-2022
nav_icon